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培養基的配制原理與操作步驟
點擊次數:399 更新時間:2024-06-17

  培養基的配制原理
  
  按照微生物生長的營養需求及其相互比例配制的。
  
  一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質,培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質,也是細胞生長和繁殖的生存環境,培養基種類很多。
  
  根據配制原料的來源可分為自然培養基、合成培養基、半合成培養基;根據物理狀態可分為固體培養基、液體培養基、半固體培養基;根據培養功能可分為基礎培養基、選擇培養基、加富培養基、鑒別培養基等。


M-綠色酵母菌-霉菌培養.jpg

  
  配制培養基的步驟
  
  1、配制溶液
  
  向容器內加入所需水量的一部分,按照培養基的配方,稱取各種原料,依次加入使其溶解,最后補足所需水分。對蛋白胨、肉膏等物質,需加熱溶解,加熱過程所蒸發的水分,應在全部原料溶解后加水補足。
  
  配制固體培養基時,先將上述已配好的液體培養基煮沸,再將稱好的瓊脂加入,繼續加熱至wan全融化。并不斷攪拌,以免瓊脂糊底燒焦。
  
  2、調節pH值
  
  用pH試紙(或pH電位計、氫離子濃度比色計)測試培養基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH進行調節,直到調節到配方要求的pH值為止。
  
  3、過濾
  
  用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養基過濾。用紗布過濾時,最好折疊成六層,用濾紙過濾時,可將濾紙折疊成瓦棱形,鋪在漏斗上過濾。
  
  4、分裝
  
  已過濾的培養基應進行分裝。如果要制作斜面培養基,須將培養基分裝于試管中。如果要制作平板培養基或液體、半固體培養基,則須將培養基分裝于錐形瓶內。
  
  分裝時,一手捏松彈簧夾,使培養基流出,另一只手握住幾支試管或錐形瓶,依次接取培養基。分裝時,注意不要使培養基粘附管口或瓶口,以免浸濕棉塞引起雜菌污染。
  
  裝入試管的培養基量,視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培養基時,每只15×150毫米的試管,約裝3~4毫升(1/4~1/3試管高度),如制作深層培養基,每只20×220毫米的試管約裝12~15毫升。每只錐形瓶裝入的培養基,一般以其容積的一半為宜。
  
  5、加棉塞
  
  分裝完畢后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣,避免污染。棉塞應采用普通新鮮、干燥的棉花制作,不要用脫脂棉,以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。
  
  制作棉塞時,要根據棉塞大小將棉花鋪展成適當厚度,揪取手掌心大小一塊,鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中,用右手食指插入棉花中部,同時左手食指與姆指稍稍緊握,就會形成1個長棒形的棉塞。
  
  棉塞作成后,應迅速塞入管口或瓶口中,棉塞應緊貼內壁不留縫隙,以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應在管內或瓶內,上端露出少許棉花便于拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆札,準備滅菌。
  
  6、制作斜面培養基和平板培養基
  
  培養基滅菌后,如制作斜面培養基和平板培養基,須趁培養基未凝固時進行。
  
  (1)制作斜面培養基。在實驗臺上放1支長0.5~1米左右的木條,厚度為1厘米左右。將試管頭部枕在木條上,使管內培養基自然傾斜,凝固后即成斜面培養基。
  
  (2)制作平板培養基。將剛剛滅過菌的盛有培養基的錐形瓶和培養皿放在實驗臺上,點燃酒精燈,右手托起錐形瓶瓶底,左手拔下棉塞,將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,左手打開培養皿蓋,右手迅速將培養基倒入培養皿中,每皿約倒入10毫升,以鋪滿皿底為度。
  
  鋪放培養基后放置15分鐘左右,待培養基凝固后,再5個培養皿一疊,倒置過來,平放在恒溫箱里,24小時后檢查,如培養基未長雜菌,即可用來培養微生物。

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