原代細胞可用來轉染siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以內的小分子 RNA 和 DNA,可轉染絕大多數原代細胞。目前,無論國外還是國內,原代細胞的核酸轉染都是個熱點難題,市場還缺乏真正有效的商品化的原代細胞核酸轉染試劑。原代細胞能夠高效轉染絕大多數原代細胞,獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對一些活體寄生蟲幼蟲,也能獲得較為理想的轉染結果。對于大多數原代細胞,RFect PM 細胞轉染陽性率都在 80%以上,而轉染細胞死亡率不到 10%。
原代細胞分離和培養基本步驟
1、器官和組織的選擇
盡可能的去除不必要的組織和血跡。
2、原代細胞的分離
(1)應用PriCells原代細胞分離試劑盒I、II、III。
(2)根據組織來源不同,可選用不同的PriCells原代細胞分離試劑盒。
3、原代細胞的培養:
(1)PriCells原代細胞特制培養基
(2)PriCells原代細胞特制添加物
(3)優質胎牛血清
4、細胞的培養和鑒定:
PriCells原代細胞鑒定試劑盒
4、原代細胞的傳代、保存
(1)傳代:依椐細胞的生長狀態,生長的細胞1:2或1:3進行傳代。
(2)保存:DMSO+培養液+血清
按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(-80℃過夜)→液氮。
5、原代細胞的復蘇
(1)取出細胞,迅速放入37℃溫水中快速解凍。
(2)吸出細胞懸液,并加10倍以上培養液。
(3)用培養液適當稀釋后接種培養瓶,放入37℃CO2培養箱靜置培養。