培養基傾注溫度小常識
1、培養基的傾注適宜溫度約45℃。培養基放置于手心感覺不燙,但是放置于手背感覺燙時,培養基溫度大約就是45℃。培養基傾注時溫度太高的話,凝固時間較長,另外皿蓋上會有大量冷凝水,不利于后續實驗。溫度太低則容易出現倒板過程中瓶中培養基部分凝固的現象。
2、有些培養基需要加入添加成分,這些添加成分在加入前應先放置到室溫,避免冷的液體造成瓊脂凝結或形成片狀物。
3、目前多數實驗室培養基滅菌后會放置水浴或者烘箱中,需使用的時候拿出來直接倒板。但培養基靜置時間不宜過長,靜置時間一般不超過4小時。靜置時間過長,培養基中瓊脂可能會少量凝固,形成類似絮狀析出。
4、在實驗過程中不可避免因特殊情況而導致未倒板培養基已凝固,凝固后培養基可重新加熱溶解。一般來說沸水浴或者電磁爐加熱,不能重新再滅一次菌。
培養基的傾倒方法主要涉及以下幾個步驟:
1.溫度調節。培養基傾注的適宜溫度大約為45℃。如果溫度過高,會導致凝固時間延長,且皿蓋上會有大量冷凝水,不利于后續實驗。如果溫度過低,則可能導致倒板過程中瓶中培養基部分凝固。
2.添加成分。如果培養基需要加入添加成分,這些成分在加入前應先放置到室溫,以避免冷的液體造成瓊脂凝結或形成片狀物。
3.靜置時間。培養基滅菌后應放置在水浴或烘箱中,使用前拿出直接倒板。培養基的靜置時間不宜過長,一般不超過4小時,以避免瓊脂少量凝固。
4.平板準備。倒皿前,平皿應保持在35℃~40℃的溫度。如果需要表面接種,有冷凝水的平板表面容易產生蔓延菌落。這時可放在有對流的無菌凈化臺中吹干培養基表面,但不能過度干燥,否則培養過程中平板容易開裂。
5.傾注量。平板傾注量一般在18~20mL左右,如果培養時間超過48小時或培養溫度高于40℃,為防止水分過量蒸發導致平板開裂,傾注量一般為25mL左右。
6.避免氣泡。倒平板時盡量貼著平皿壁緩慢倒入,將氣泡留在瓶子底部。如果平板中有少量氣泡的話,可以把氣泡輕搖到平板壁上,這樣不會影響結果觀察。
7.混合均勻。每個平板中加入10mL融化的瓊脂培養基并迅速往復搖動和轉圈晃動5~15次使培養基與接種物充分混合。
8.培養。待平板冷卻后翻轉并置于適當的溫度下培養。
在整個操作過程中,需要注意避免污染,使用前需將裝有培養基的瓶子或試管弄松,然后放在滾水或蒸汽浴里進行溶解,要小心避免培養基過熱變質。已消毒培養皿的數量要比所測樣品的數量多一個做空白對照。