菌種提純復(fù)壯的幾個(gè)主要方法
1、純種分離法
通過(guò)純種分離,可將衰退菌種細(xì)胞群體中一部分仍保持原有典型性狀的單細(xì)胞分離出來(lái),經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng),就可恢復(fù)原菌株的典型性狀。常用的分離純化的方法可歸納成兩類(lèi):一類(lèi)較粗放,只能達(dá)到“菌落純”的水平,即從種的水平來(lái)說(shuō)是純的。例如采用稀釋平板法、涂布平板法、平板劃線(xiàn)法等方法獲得單菌落。另一類(lèi)是較精細(xì)的單細(xì)胞或單孢子分離方法。它可以達(dá)到“細(xì)胞純”即“菌株純”的水平。后一類(lèi)方法應(yīng)用較廣,種類(lèi)很多,既有簡(jiǎn)單的利用培養(yǎng)皿或凹玻片等作分離室的方法,也有利用復(fù)雜的顯微操縱器的純種分離方法。對(duì)于不長(zhǎng)孢子的絲狀菌,則可用無(wú)菌小刀切取菌落邊緣的菌絲尖jian端進(jìn)行分離移植,也可用無(wú)菌毛細(xì)管截取菌絲尖jian端單細(xì)胞進(jìn)行純種分離。
2、宿主體內(nèi)復(fù)壯法
對(duì)于寄生性微生物的衰退菌株,可通過(guò)接種到相應(yīng)昆蟲(chóng)或動(dòng)植物宿主體內(nèi)來(lái)提高菌株的毒性。例如蘇云金芽孢桿菌經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期人工培養(yǎng)會(huì)發(fā)生毒力減退、殺蟲(chóng)率降低等現(xiàn)象,可用退化的菌株去感染菜青蟲(chóng)的幼蟲(chóng),然后再?gòu)牟∷赖南x(chóng)體內(nèi)重新分離典型菌株。如此反復(fù)多次,就可提高菌株的殺蟲(chóng)率。根瘤菌屬經(jīng)人工移接,結(jié)瘤固氮能力減退,將其回接到相應(yīng)豆科宿主植物上,令其侵染結(jié)瘤,再?gòu)母鲋蟹蛛x出根瘤菌,其結(jié)瘤固氮性能就可恢復(fù)甚至提高。
3、淘汰法
將衰退菌種進(jìn)行一定的處理(如藥物,低溫、高溫等),往往可以起到淘汰已衰退個(gè)體而達(dá)到復(fù)壯的目的。如有人曾將大菱鲆胃腸道內(nèi)提取的芽孢桿菌的分生孢子在低溫(-10℃~ -30℃ )下處理5~7 d,使其死亡率達(dá)到80%,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在抗低溫的存活個(gè)體中留下了未退化的健壯個(gè)體。
4、遺傳育種法
即把退化的菌種,重新進(jìn)行遺傳育種,從中再選出高產(chǎn)而不易退化的穩(wěn)定性較好的生產(chǎn)菌種。