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抽提RNA實(shí)驗(yàn)色素污染去除方法
點(diǎn)擊次數(shù):542 更新時(shí)間:2024-03-01
 

  用Trizol法沉淀RNA容易有一些雜質(zhì)的。部分色素是會和RNA一起沉下來。這種情況可以用75%冷的乙醇多洗幾遍。對后續(xù)qRT-PCR多數(shù)情況下沒什么影響。

  另外可以用硅膠柱法純化RNA,色素殘留會少一些。

  RNase污染的來源

  1:手指頭 – 手指頭是外源酶的第一來源,所以必需戴手套并且頻繁更換。另外,口罩也必需戴,因?yàn)楹粑彩且粋€(gè)重要的酶來源。戴手套口罩的另外的好處是保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員。

  2:槍頭,離心管,移液器 單純的滅菌是不能滅活RNase的,所以槍頭和離心管要用DEPC處理,即使是標(biāo)明為DEPC處理過的。移液器最好是專用的,用前用75%的酒精棉球搽拭干凈,尤其是桿子;另外,一定不要使用褪頭器。

  3:水/緩沖液 一定要確保無RNase污染。 

  4:實(shí)驗(yàn)臺面最起碼要用 75% 的酒精棉球搽拭干凈。

  5:內(nèi)源 Rnase 所有組織均含內(nèi)源酶,故組織用液氮速凍是降低降解的最好辦法。液氮保存/碾磨方法的確不方便,但對有一些內(nèi)源酶含量很高的組織,卻是唯1的辦法。

  6:RNA 樣品 RNA抽提產(chǎn)物可能都會含痕量的RNase污染。

  7:質(zhì)粒抽提 質(zhì)粒抽提往往用到RNase降解RNA,殘留的RNase要用 Proteinase K 消化,PCI 抽提。

  8:RNA 保存 即使低溫保存,痕量的RNase亦會導(dǎo)致RNA降解。長期保存RNA的最好辦法是鹽/醇懸液,因?yàn)榇荚诘蜏貢r(shí)抑制所有的酶活性。

  9:陽離子 (Ca, Mg) 在含這些離子時(shí),80℃加熱5分鐘會導(dǎo)致RNA被剪切,故如果RNA需要被加熱,保存液需要含螯合劑(1mM Sodium Citrate, pH 6.4)。

  10:后續(xù)實(shí)驗(yàn)所用的酶 酶均有可能被Rnase污染。

 


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