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石蠟包埋組織microRNA快速提取試劑盒
點擊次數:1039 更新時間:2016-12-09

石蠟包埋組織microRNA快速提取試劑盒(離心柱型)

——由遠慕生物技術提供,僅參考!


一、原理簡介
改進的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細胞和滅活 RNA 酶,然后總 RNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質去除,zui后低鹽的 RNasefree water 將純凈 RNA(microRNA)從硅基質膜上洗脫。


二、試劑盒特點
1. 離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口世界公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好??朔藝a試劑盒膜質量不穩(wěn)定的弊端。
2. 結合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點,不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程,RNA 可以直接從離心柱上洗脫避免了過度干燥不易溶解問題。
3. *的 MRL 裂解液配方,可以有效的消除基因組污染。
4. 多次漂洗去蛋白過程,提取 RNA 純度更高。


三、注意事項(實驗前必須首先閱讀這部分?。?br />1. 為防止RNA降解,所有離心步驟如未加說明,均在4℃低溫進行。使用轉速可以達到13,000 rpm的傳統(tǒng)臺式離心機,如Eppendorf5415C 或者類似離心機。
2. 裂解液 MRL 中含有刺激性有害化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
3. 預防 RNase 污染,在實際的操作中應遵循以下指南(參見《分子克隆》)

* 全程佩戴一次性手套。皮膚經常帶有細菌和霉菌,可能污染RNA的抽提并成為RNA酶的來源。培養(yǎng)良好的微生物實驗操作習慣預防微生物污染。

* 使用滅菌的、一次性的塑料器皿和自動吸管抽提RNA,避免使用公共儀器所導致的RNA酶交叉污染。

* 使用無 RNA 酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在 150°C 的烘箱中烘烤 4 小時,塑料器皿可以在 0.5 M NaOH 中浸泡 10 分鐘,用水*漂洗干凈后高壓滅菌備用。
4. 考慮到環(huán)保問題,本試劑盒不含有實驗室常用試劑,用戶使用前需要自備。
5. 常規(guī)的瓊脂糖凝膠電泳和變性膠電泳均可以用來分析大 RNA 的質量。好的 RNA 產物在電泳后應該可以看到明顯的二條優(yōu)勢核糖體 RNA 帶,分別為~5Kb(28S),~2Kb(18S),條帶亮度比值約為 2:1。
6. 檢測 OD260/OD280吸光度比值時,RNA 樣品應該溶于 TE 后檢測,如果用水稀釋后檢測,由于一般水離子強度和 PH 值低,會使 OD280升高,從而使比值降低。
7. 加入裂解液 MRL 勻漿后,加前,樣品可在 –60℃-70℃ 保存一個月以上。

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