經驗講談ELISA試劑盒實驗問題分析方案
實驗問題出現之后找到原因就會很容易解決,今天上海遠慕生物您帶來了技術分享內容。主要是相關ELISA實驗的一些問題解決,下面一起來看經驗講談ELISA試劑盒實驗問題分析方案:
*、陰性樣本的吸光度值低于陽性吸光度值原因:
可能原因是出現跳孔的現象或酶標板孔中的試劑未充分的混合。解決的辦法是注意操作的方法,注意洗滌時的方法、加完試劑后可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30s,混勻液體。
第二、吸光度值偏高是怎么回事;
可能引起的原因有孵育的溫度過高、反應的時間過長。相對應的解決辦法是調整孵育環境的溫度,如無法調整室內的溫度,請將顯色時間適當的縮短、控制反應時間。
第三、樣品的稀釋:
樣品稀釋前、后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性。
ELISA反應是一種敏感性很高的反應,如果血清不稀釋,不可避免會產生很強的非特異性反應,出現假陽性。因此,國外檢測血清抗體的試劑盒,均規定將血清稀釋至適當的倍數,以降低非特異性反應,使特異性的抗原抗體反應充分體現出來。一般產品的樣品稀釋倍數均通過大量試驗確定,以保證試驗的靈敏度和特異性。但是,有些用戶未能嚴格按使用說明書操作,如某些產品應取10μl樣品進行稀釋,個別用戶取5μl甚至1μl樣品進行稀釋,由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠,因此造成樣品稀釋倍數不準確,檢測結果出現問題。
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