用人血清進行噬菌體ElISA嗎?
點擊次數:1244 更新時間:2015-11-19
用人血清進行噬菌體ElISA嗎?您可知!下面就是上海遠慕生物技術人員的簡單解說:
[器材和試劑]
● 包被緩沖液
● PBST
● PBBST[PBS,1%TritonX—100,3% BSA(Sigma)]
● 兔抗人Fc—特異性IgG(Pierce):用包 被緩沖液稀釋為5.0ug/ml①
● HRP標記的抗噬菌體抗體(Amersham Biosciences):用封閉液以1/10000比例 稀釋
● 顯色液[3,3’,5,5’—四甲基聯苯胺 (TMB)液體底物系統,Sigma]
[方法]
1.將200ul兔抗人Fc—特異性IgG等量分加到各孔中。4℃孵育過夜。
2.用PBST洗滌多孔板。
3.加250ul PBBST。37℃孵育2小時。
4.棄去PBBST,將200ul噬菌體上清等量加入各孔。每孔中加入0.25ul血清,37℃振 蕩孵育60分鐘。
5,用PBST洗滌板孔。
6.加200gl HRP標記的羊抗噬菌體抗體。37℃振蕩孵育30分鐘。
7.用PBST洗滌板孔。
8.每孔中加200ul顯色液。室溫避光孵育15分鐘。加25ul 2mol/L H2S04終止反應。分 析前在酶標儀中振蕩10秒。
9.用自動酶標儀將A405和A655間的差值作為結果記錄。